MM_FS_CNJ_0071 出口禽肉中二氯二甲吡啶酚残留量检验方法

MM_FS_CNJ_0071出口 禽肉 二氯二甲吡啶酚 残留量 甲基化-气相色谱法 内标法定量

MM_FS_CNJ_0071

      出口禽肉中二氯二甲吡啶酚残留量检验方法

1.适用范围

    本方法适用于出口鸡肉中二氯二甲毗啶酚残留量的检验。

2.原理概要

    用甲醇提取鸡肉组织内的二氯二甲吡啶酚，离心后的上清液经中性氧化铝和阴离子交换柱净化。洗脱液经重氮甲烷试剂甲基化，生成的二氯二甲吡啶甲醚(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基吡啶)用配有电子俘获检测器的气相色谱仪测定，以2,4-二硝基氯苯为内标进行定量。

3.主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

    甲醇；

    中性氧化铝：层析用，100～200目；300℃灼烧4h，置于干燥器备用；

    阴离子交换树脂：Dowex 1-X8，100～200目，氯型。或等效品；

    乙酸甲醇溶液：0.6%(V/V)。3mL冰乙酸溶于497mL甲醇中；

    正己烷：加碱重蒸馏；

    内标：2,4-二硝基氯苯，纯度＞99%；

    提取用的硝基氯苯正已烷溶液：0.1μg 2,4-二硝基氯苯/mL正已烷溶液；

    重氮甲烷试剂：在125mL的蒸馏瓶中加入35mL乙醇、10mL乙醚和10mL氢氧化钾水溶液(6g/10mL)。放入磁棒，并固定在磁力搅拌器加热板上的水浴中。连接漏斗和冷凝器并串联两个125mL锥形瓶，锥形瓶中各置有10mL乙醚。冷凝收集管插入乙醚液面。锥形接收瓶置于冰浴中。滴液漏斗内盛有21.5g的N-甲基-N-亚硝基-p-甲苯磺酰胺溶于140mL乙醚的溶液(重氮试剂)。加热水浴至70℃，进行蒸馏，蒸馏瓶内溶液边用磁力搅拌，边滴加重氮试剂，滴完全部溶液的时间控制在20min以上。当馏出液近于无色时，停止蒸馏。将两个锥形接收瓶中的溶液合并，并在70℃水浴上重蒸馏。将馏出液-重氮甲烷试剂密封，并于－18℃保存。保存期一个月；

    二氯二甲吡啶酚标准品：纯度＞99%；

        二氯二甲吡啶酚标准贮备液：100μg/mL。准确称取100.0mg二氯二甲吡啶酚标准品，用甲醇移入1000mL容量瓶至总体积约600mL，振荡溶解(约需2～3h)。用甲醇定容到刻度，混匀；

        中间标准溶液(Ⅰ)：10μg/mL。用移液管移取上述标准贮备液10mL于100mL容量瓶内，用甲醇稀释至刻度；

        中间标准溶液(Ⅱ)：1μg/mL。用移液管移取中间标准溶液(Ⅰ)10mL于100mL容量瓶内，用甲醇稀释至刻度；

        标准工作溶液：0.1μg/mL。用移液管移取中间标准溶液(Ⅱ)10mL于100mL容量瓶内，用甲醇稀释至刻度。

3.2.仪器

    搅肉机：电动；

    均质机：3000r/min；

    离心机：日立20 PR-5204000r/min或相当的设备；

    中性氧化铝柱：称取2g中性氧化铝，填入100mm×10mm(内径)玻璃层析柱内；

    阴离子交换层析柱：将Dowex 1-X8阴离子交换树脂伴以去离子水移入250mm×10mm(内径)层析柱内，沉降后柱床高度为1.5cm。以100mL 1mol/L的NaOH水溶液淋洗树脂，继以去离子水淋洗至中性；再以100mL 0.5mol/L的乙酸钠水溶液淋洗，继以去离子水淋洗至中性。流速均为2mL/min。注入甲醇水溶液(8∶2)50mL备用。使用前放出甲醇水溶液，使液面略高于树脂层；

    试管：带旋盖(耐压并气密性的)，100mm×13mm(内径)；

    气相色谱仪并配有电子俘获检测器；

    微量注射器：10μL。

4.试样的抽取与制备

4.1.检验批

    以不超过2500箱为一个检验批。

    同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。

4.2.抽样数量

4.3.抽样方法

    按规定的抽样箱数随机抽取，逐箱开启。每箱至少取一袋作为原始样品；原始样品总量不少于2kg，加封后，标明标记，及时送实验室。

4.4.试样制备

    从每袋原始样品中取部分有代表性鸡肉样，用绞肉机绞碎，将全部绞碎的样品混匀；用四分法缩分出试样量不少于500g，分装入清洁容器内，加封后，标明标记。

4.5.试样保存

    试样于－18℃下冷冻保存。

注：在抽样和制样过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

5.过程简述

5.1.提取

    称取约20g试样(精确至0.1g)于均质瓶内，加入100mL甲醇，3000r/min均质4min后，将均质瓶移入离心机，4000r/min离心10min。

5.2.净化

    将阴离子交换柱置于中性氧化铝柱下，用移液管移20mL提取的上清液于氧化铝柱中，使提取液经中性氧化铝和阴离子交换柱流入烧杯。用10mL甲醇清洗中性氧化铝柱的柱壁。移去氧化铝柱和烧杯，将25mL的比色管置于阴离子交换柱的下方，用两份10mL的0.6%乙酸甲醇溶液洗脱二氯二甲吡啶酚，洗提液流速：1mL/min。用甲醇定容并混匀。

5.3.甲基化

    用移液管移取定容的洗提液5mL于试管内，试管置于70℃水浴内，通以氮气流吹干。取出试管，加入0.2mL甲醇水溶液(8∶2)，微温使残渣溶解，冷却至室温。加1mL重氮甲烷试剂，拧上旋盖，将试管置于70℃水浴中保温反应2min。反应时，试管内的液面和水浴面持平。取出试管，冷却至室温。拧去旋盖，仅使管底部接触水面，直至乙醚蒸除。于除去乙醚后的试管内加5mL去离子水和1.00mL提取用的硝基氯苯正己烷溶液，加盖，在混和器上混和1min。取出试管，4000r/min离心3min。所制成的上层正已烷样液供气相色谱测定。

5.4.测定

5.4.1.色谱条件

色谱柱：玻璃柱，2m×2mm(内径)，填充物为10%(m/m)DC-200硅油涂于Chromosorb WhP载体(80～100目)；

氮气：纯度≥99.99%，60mL/min；

柱温：170℃；

进样口温度：200℃；

检测器温度：300℃。

5.4.2.色谱测定

    将样液(如有必要，可多加提取用的硝基氯苯正已烷溶液，作进一步稀释)注入气相色谱柱，进样量2μL。在上述色谱条件下二氯二甲吡啶甲醚出峰保留时间约为2min，2,4-二硝基氯苯出峰保留时间约为4min。

5.5.标准曲线的绘制

    分别取二氯二甲吡啶酚标准工作溶液0，0.1，0.2，0.4，0.8，1.6mL于各个试管内，按上述步骤(5.3～5.4)进行，但略去“定容的洗提液5mL”。以所得各浓度二氯二甲吡啶甲醚色谱峰高和内标峰高之比，对应实际标准溶液的浓度(μg/mL)绘制标准曲线。

5.6.回收系数r

    称取三份19.9～20.1g(精确至0.1g)不含二氯二甲吡啶酚的试样，分别加入相当于0.0，0.01和0.05μg/g的二氯二甲吡啶酚中间标准溶液(Ⅱ)(分别为0.0，0.2和1mL)。按5.1～5.4条操作，并计算出平均回收系数R。

5.7.空白试验：除不称取试样外，均按上述测定步骤(5.1～5.4)进行。

6.结果计算

    按下式计算试样中二氯二甲吡啶酚的含量：

式中：X——鸡肉中二氯二甲吡啶酚含量，mg/kg；

R——平均回收率；

c——由标准曲线查得最终样液中二氯二甲吡啶酚的含量，μg/mL；

V——最终样液的体积，mL；

m——最终样液所代表的样品量，g；

    二氯二甲吡啶酚含量亦可由色谱数据处理机直接求得。

注：计算结果需将空白值扣除。

7.低限、回收率的测定

7.1.测定低限

    本方法测定低限为0.005mg/kg。

7.2.回收率

    回收率实验数据：

        二氯二甲吡啶酚添加浓度在0.005～0.025mg/kg范围内，回收率为65.4%～86.2%。

8.来源：

    SN/T 0212.2—93