MM_FS_CNJ_0143 出口肉及肉制品中十种磺胺留量检验方法

MM_FS_CNJ_0143出口肉 肉制品 十种磺胺 残留量 液相色谱法 外标法定量

MM_FS_CNJ_0143

     出口肉及肉制品中十种磺胺留量检验方法

1.适用范围

    本方法适用于出口猪肉中十种磺胺残留量的检验。

2.原理概要

    肉中十种磺胺的残留量用乙腈-氯仿混合溶剂提取，用具紫外检测器的高效液相色谱仪检测，外标法定量。

3.主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

    乙腈：分析纯；

    氯仿：分析纯；

    正己烷：分析纯；

    无水硫酸钠：分析纯；

    乙腈-氯仿混合溶剂(10＋1)；

    乙腈-氯仿混合溶剂(1＋2)；

    硫酸钠溶液：10%水溶液(m/V)；

    硫酸钠溶液：2%水溶液(m/V)；

    流动相：乙腈＋乙酸＋水(18＋1＋81)；

    标准品：纯度≥99%；

a.磺胺；

b.磺胺嘧啶；

c.磺胺吡啶；

d.磺胺噻唑；

e.磺胺甲嘧啶；

f.磺胺甲噻二唑；

g.磺胺二甲嘧啶；

h.磺胺氯哒嗪；

i.磺胺甲基异口恶唑；

j.磺胺二甲异口恶唑；

    标准溶液

    标准储备液：准确称取10种磺胺标准品各10.0mg，分别入各自的100mL容量瓶，用乙腈溶解，并用乙腈稀释定容，混匀。即得10种磺胺标准储备液。每种磺胺标准品的浓度为100μg/mL；

    混合标准中间液：分取10种磺胺标准储备液各2.5mL，入100mL容量瓶，用流动相稀释定容，即得混合标准溶液。该混合标准溶液含每种磺胺2.5μg/mL；

    混合标准工作液：分取20，50，100，200μL混合标准中间液，分别用流动相稀释定容至1mL，即得混合标准工作液。该混合标准工作液含每种磺胺分别为0.05，0.125，0.25，0.50μg/mL。该工作液当日新配。

3.2.仪器

    液相色谱仪并配有紫外检测器；

    多功能电搅机或相当的仪器；

    涡流混匀器；

    超声波发生器；

    离心机；

    离心管：15mL；

    高速台式离心机；

    气流加热快速浓缩装置；

    微量可调移液管；

    尖嘴吸液管。

4.试样的抽取与制备

4.1.检验批

    以不超过2500件为一检验批。

    同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。

4.2.抽样数量

4.3.抽样方法

    按规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品。原始样品总量不少于2kg，放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送实验室。

4.4.试样制备

    从每袋原始样品中取出部分代表性样品，将可食部分放入高速组织捣碎机中捣碎，充分混匀，用四分法缩分出不少于500g，装入清洁的容器内，加封后，标明标记。

4.5.试样保存

    样品应于－18℃冷冻保存。

注：在抽样及制样过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

5.过程简述

5.1.提取及净化

    称取2.00g均匀试样，防至15mL离心管内，加入0.5mL10%硫酸钠水溶液和4.4mL乙腈-氯仿混合溶剂(10＋1)。在涡流混匀器上剧烈混合成匀浆，以提取磺胺。其后，离心3min(3500r/min)。用尖嘴吸液管将上清液转入第二支15mL离心管内，再用2mL乙腈-氯仿混合溶剂(10＋1)提取残渣，离心3min，提取液并入第二支离心管。将该离心管置于气流加热快速浓缩装置中，于＜40℃蒸发至干。向残渣添加1mL2%硫酸钠水溶液和2mL正己烷，在涡流混匀器上剧烈混合，使残渣溶解，离心3min。用尖嘴吸液管移去己烷层，并弃去。再用2mL正己烷洗水相一次，同法弃去己烷相，分别向水相中加入1mL、2mL乙腈-氯仿混合溶剂(1＋2)，于涡流混匀器上剧烈混合，以便混合溶剂从水相中反提取磺胺，离心3min。用尖嘴吸液管将下层有机相转入第三支离心管内，置于气流加热快速浓缩装置内，于＜40℃蒸发至干。以流动相溶解残渣，并准确定容1mL。于16000r/min离心5min，上清液供LC测定。

5.2.测定

5.2.1.色谱条件

色谱柱：不锈钢柱，250mm×4.6mm(内径)，填充物10μm ODS。

柱温：45℃。

流动相：乙腈＋乙酸＋水(18＋1＋81)。

流动相流速：1.10mL/min。

检测器：UV285nm。

衰减：0.04AUFS。

纸速：5mm/min。

试样量：10μL。

5.2.2.色谱测定

    分别向液相色谱仪注入等体积标准工作液和样液，在45℃，以1.10mL/min的流速洗脱，用UV检测器于285nm处检测，记录色谱峰高，并与相应的标准峰高进行比较，外标法定量。

    在上述条件下，保留时间(min)为：磺胺6.0，磺胺嘧啶8.3，磺胺吡啶8.8，磺胺噻唑9.8，磺胺甲嘧啶10.5，磺胺甲噻二唑12.2，磺胺二甲嘧啶13.1，磺胺氯哒嗪16.7，磺胺甲基异口恶唑19.3，磺胺二甲异口恶唑23.6。

5.3.空白试验

    除不加试样外，按上述步骤进行。

6.结果计算

    用色谱数据处理机或按下列公式计算：

式中：X——磺胺残留量，mg/kg；

h——样液中磺胺的峰高，mm；

h_s——标准工作溶液中磺胺的峰高，mm；

c——标准工作溶液中磺胺的浓度，μg/mL；

m——称取的试样量，g；

V——样液最终定容体积，mL。

注：计算结果需扣除空白值。

7.低限和回收率的测定

7.1.测定低限：5μg/kg。

7.2.回收率

    回收率的实验数据，浓度范围在0.05～0.25mg/kg时，回收率各为：

8.来源：

    SN  0208—93