MM_FS_CNJ_0068 出口禽肉中氨丙嘧吡啶残留量检验方法

MM_FS_CNJ_0068出口 禽肉 氨丙嘧吡啶 残留量 薄层色谱法

MM_FS_CNJ_0068

      出口禽肉中氨丙嘧吡啶残留量检验方法

1.适用范围

    本方法适用于出口鸡肉中氨丙嘧吡啶残留量检验。

2.原理概要

    用三氯乙酸溶液提取试样中的氨丙嘧吡啶。提取液经碱性氧化铝柱净化，用氯化钾盐酸溶液洗脱后，在碱性条件下加入银和铁溶液，使衍生成荧光物质，于薄层板分离，用薄层扫描仪测定。

3.主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

    三氯乙酸溶液：5%。称取5g三氯乙酸，溶于100mL水中；

    氯化钾盐酸溶液：25%。称取25g氯化钾，溶于0.1mol/L盐酸使成100mL。如析出结晶，则加温使之完全溶解；

    铁溶液：2%。称取2g铁〔K₃Fe(CN)₆〕，溶于100mL水中。转移至棕色瓶中，于冰箱中保存；

    银溶液：2%。称取2g银，溶于100mL水中。转移至棕色瓶中，于冰箱中保存；

    氢氧化钠溶液：30%、10%。称取30g、10g氢氧化钠，分别溶于100mL水中；

    异丁醇：优级纯；

    氧化铝：碱性，层析用，100～200目；

    无水硫酸钠：650℃灼烧4h，置干燥器内备用；

    高效薄层板：薄层层析用硅胶G板，5cm×10cm、10cm×10cm，层厚0.25mm；

    展开剂：吡啶-异丁醇-水(66＋17＋17)；

    氨丙嘧吡啶标准品：纯度≥99%；

    氨丙嘧吡啶标准溶液：精确称取氨丙嘧吡啶标准品10.0mg于小烧杯中，用水溶解，转移至500mL容量瓶中，稀释定容。此做为标准储备溶液，浓度为20.0μg/mL。用移液管移取此溶液5mL于另一容量瓶中，加水稀释至500mL。此为标准工作溶液，浓度为0.2μg/mL。

3.2.仪器

    荧光分光光度计，配有薄层扫描装置，或薄层扫描仪；

    高速组织捣碎机；

    振荡器：往复式；

    离心机：3000r/min；

    旋转蒸发器；

    紫外灯：100～125W，滤光片365nm；

    层析缸；

    自动点样仪；

    微量注射器：5μL、10μL、20μL、50μL；

    锥形瓶：具塞，250mL；

    离心管：具塞带刻度，50mL；

    量筒：50mL、100mL；

    蒸发皿：50mL、100mL；

    层析柱：20cm×1cm(id)玻璃柱，下具活塞。底部装少许脱脂棉，装约3～5g碱性氧化铝；

    恒温水浴锅；

    瓷研钵；

    样品瓶：棕色，3mL。

4.试样的抽取与制备

4.1.检验批

    以不超过2500件为一检验批。

    同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。

4.2.抽样数量

4.3.抽样方法

    按规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品，原始样品总量不少于2kg。放入洁净容器内，加封后，标明标记，及时送交实验室。

4.4.试样制备

    从每袋原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入高速组织捣碎机中捣碎均匀，充分混合，用四分法缩分出不少于500g。装入洁净容器内，加封后标明标记。

4.5.试样保存

    将试样于－18℃以下冷冻保存。

注：在抽样及制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

5.过程简述

5.1.提取和净化

    取经绞碎混匀的试样20g(精确到0.1g)于瓷研钵中，加40g无水硫酸钠，研磨脱水，转移至250mL锥形瓶中。准确加入三氯乙酸溶液60mL，于振荡器上提取30min。移取上层试液于50mL离心管中，以3000r/min离心5min。

    准确吸取上清液15mL，加入氢氧化钠溶液(10%)数滴使之成为碱性，移入层析柱中。用水洗涤柱子，弃去流出液。用氯化钾盐酸溶液25mL洗脱柱中氨丙嘧吡啶，使其自然流出，收集洗脱液于50mL带刻度离心管中。

    于洗脱液中加入4mL氢氧化钠溶液(30%)，混匀。再加入银溶液0.4mL，摇匀，静置2min。加入铁溶液2mL，摇匀。加入异丁醇12mL，振摇1min，以3000r/min离心15min。

    取上层异丁醇溶液9mL于蒸发皿中，在60～70℃水浴上蒸发近干，并自然挥发干。用0.3mL异丁醇溶解残渣并转移至样品瓶中，供测定用。

5.2.测定

5.2.1.薄层扫描条件

光源：氙灯；

激发波长352nm，发射波长420nm；

激发狭缝10mm，发射狭缝10mm；

光电压750V；

扫描速度60mm/min，纸速5cm/min。

5.2.2.标准曲线的绘制

    取0.2μg/mL氨丙嘧吡啶标准工作溶液10mL，按5.1从“加入4mL氢氧化钠溶液(30%)……”开始，至“……供测定用”操作进行。分别在薄层板上滴加1、2、3、4、5μL标准工作溶液，相当于标准量为5、10、15、20、25ng，经薄层展开后测定。以氨丙嘧吡啶的含量(ng)对相应的峰面积(或峰高)绘制标准曲线。

5.2.3.薄层色谱测定

    将高效薄层板在105～110℃活化2h后，置干燥器内备用。如超过一周使用时，需重新活化。

    取适宜体积的标准工作溶液和样品溶液在薄层板上距下端1.5～2cm基线上，参插点样，每点间隔1cm。

    将薄层板放入用吡啶-异丁醇-水(66＋17＋17)预饱和的层析缸中展开10～15min，至前沿达约10cm，取出吹干。

    在紫外灯365nm下观察薄层板结果，氨丙嘧吡啶呈蓝紫色荧光点。根据标准点的R_f值确定样品中氨丙嘧吡啶位置，标出标记，按薄层扫描条件进行测定。

5.3.空白试验：除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

6.结果计算

    按薄层扫描测定所得样液中氨丙嘧吡啶的峰面积(或峰高)，从标准曲线上查出相应的氨丙嘧吡啶的量(ng)并按下式计算试样中氨丙嘧吡啶含量：

式中：X——试样中氨丙嘧吡啶含量，mg/kg；

c——在标准曲线上查出相应氨丙嘧吡啶的量，ng；

V₁——样液最后定容体积，μL；

V₂——样液滴加在薄板上的体积，μL；

m——最终样液所相当的试样量，mg。

注：空白值应从计算结果中扣除。

7.低限、回收率的测定

7.1.测定低限

    本方法的测定低限为0.02mg/kg。

7.2.回收率

    回收率的实验数据：氨丙嘧吡啶添加浓度在0.02～0.10mg/kg范围内，回收率为78.0%～91.6%。

8.来源：

    SN  0276—93